高压蒸汽灭菌锅俗称灭菌锅，是对培养基（培养料）进行湿热灭菌的设备。制作母种宜用小型手提式灭菌锅或中型立式灭菌锅。制作原种、栽培种或代料熟料栽培时，可用大型卧式灭菌锅（灭菌柜）。正确使用灭菌锅，是安全生产的保障。

（1）灭菌锅加水

除部分灭菌锅配有专用供汽锅炉外，其他灭菌锅均需添加适量清水，再由水产生蒸汽。为此，加水必须注意两点：一是水质，二是水量。水质不仅要求清洁，而且用蒸馏水或去离子水，以免长期使用后产生水垢，影响设备正常使用。水量需按说明书要求加足，切忌过多或过少。

（2）灭菌锅装载量

为了便于蒸汽在灭菌锅内畅通循环，每次装载量要适当。一般提倡留下1/5～1/4的容积，既经济又有效。特别是袋装培养料，更要预留蒸汽通道，以免影响灭菌效果。

（3）排气升温

关闭灭菌锅门，开始加热升温。当锅内压力达到0.04兆帕时，需将锅内的冷空气排净，否则压力与温度不能同步上升，出现低温高压现象，影响灭菌效果

灭菌锅内空气排除程度与温度的关系工作压力工作温度（℃）兆帕（千克力/厘米2）冷空气全排冷空气排2/3冷空气排1/2冷空气排1/3冷空气未排0.035（0.35）720.07（0.70）900.11（1.05）1000.14（1.41）1090.175（1.76）1150.21（2.00）121（4）灭菌条件

母种培养基的灭菌条件是：121℃，0.11兆帕，20～30分钟；原种、栽培种培养基的灭菌条件是：126℃，0.14兆帕，1.5～2小时。

1．首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 

2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 

3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 

4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 1．05kg/cm2，121．3℃，20分钟灭菌。 

5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。如果压力未降到0时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。 

6．将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。